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藏药三果汤影响糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡及增殖的研究认领

被引量： 8

作者：

方山丹

学位授予单位：

云南中医药大学

摘要：

糖尿病是一种发病率呈现持续升高趋势的内分泌疾病,胰岛β细胞凋亡和增殖是糖尿病发病的重要原因之一。研究发现,高糖可通过激活线粒体途径和炎症小体途径等途径诱导胰岛β细胞凋亡,进而抑制胰岛素的分泌,最终导致糖尿病的发生。因此,抑制胰岛β细胞凋亡,对于延缓糖尿病的发生有着很重要的意义。藏药三果汤是一种常用于治疗高原红细胞增多症的方剂,国外研究发现,藏药三果汤可抑制α葡萄糖苷酶来降低人体的空腹血糖。但关于藏药三果汤可通过抑制胰岛β细胞凋亡治疗糖尿病的研究尚无报道。因此本课题对不同剂量的藏药三果汤能否影响肠促胰素（incretin）信号途径调节高糖诱导的胰岛β细胞凋亡和胰岛β细胞增殖进行研究,为藏药三果汤治疗糖尿病的研究与开发提供一定的依据及参考。第一部分藏药三果汤中没食子酸含量测定目的建立测定藏药三果汤水提物中主要成分没食子酸的HPLC方法。方法采用Agilent C18 ZORBAX SB-C18柱（4.6×250mm,5 um）;流动相:甲醇-0.3%磷酸（4:96）;检测波长:273nm;柱温:25℃;流速:1mL/min的色谱条件进行含量测定。结果藏药三果汤水提物中没食子酸的色谱峰与杂质峰分离效果良好,且色谱峰没出拖尾的现象,在0.16-0960μg（r2=0.9997）内线性关系良好,平均含量为13.515mg/g,平均加样回收率为97.15%,RSD为1.78%。结论本方法出峰时间短,流动相组成较简单,重现性良好,测得没食子酸含量较多,也可为藏药三果汤水提物质控提供一定参考依据。第二部分藏药三果汤对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡与增殖的影响目的探讨藏药三果汤对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡与增殖的影响。方法给Wistar雄性大鼠单次腹腔注射STZ造模,3 d后测随机血糖,如果随机血糖≥16.7mmol/L,则认为造模成功,灌胃0.43g/kg、0.86g/kg、1.72g/kg剂量的三果汤进行治疗,阳性药选用西格列汀进行灌胃给药治疗,给药6周后,取血、剥离胰腺组织,用ELISA法检测大鼠血清中GLP-1、GIP的水平变化、胰腺组织中cAMP的水平变化,进行HE染色、醛品红-橙黄G染色、缓冲硝酸银染色观察胰岛、胰岛β细胞及胰岛α细胞变化情况,Western blot法测定高糖状态下胰腺组织中TXNIP、GLP-1R、insulin、TCF7L2、AKT的表达变化。结果1.建模成功的糖尿病大鼠给药6周后,测定血清GLP-1、GIP水平及胰腺组织中cAMP的水平,与模型组相比,三果汤给药组血清GLP-1、GIP水平均升高（p<0.01）,三果汤给药组cAMP的水平升高（p<0.01）。3.病理切片结果:（1）HE染色显示:正常组大鼠胰腺组织镜下观察胰岛较大,胰岛细胞较多,处于中央位置;模型组大鼠胰岛萎缩,胰岛细胞数量较少,胰岛与周边细胞界限不明显;（2）胰岛细胞橙黄G染色显示:模型组胰岛β细胞减少,胰岛β细胞胞质内颗粒较少。而阳性组、三果汤给药组胰岛β细胞数量相对较多,胰岛形态也有所恢复。（3）缓冲硝酸银染色显示:模型组胰岛α细胞增多,胞质内颗粒含量较多。而阳性组、三果汤给药组胰岛α细胞数量相对较少。4.Western结果显示:与正常组相比,模型组TXNIP、TCF7L2蛋白表达上调,GLP-1R、insulin、AKT蛋白表达均下调（p<0.01）,给予藏药三果汤灌胃后,与模型组相比,三果汤给药组TXNIP、TCF7L2蛋白表达均下调（p<0.05）,GLP-1R、insulin、AKT蛋白表达均上调（p<0.01）。结论:藏药三果汤可通过抑制TXNIP的表达,提高Wnt/β-catenin通路活性,从而升高血清incretin（GLP-1及GIP）水平,增加细胞内cAMP水平、促进胰岛素分泌、抑制β细胞凋亡、促进胰岛β细胞增殖。

摘要译文

关键词：

高糖; 胰岛β细胞凋亡; 藏药三果汤; Wnt/β-catenin; 肠促胰素

学位年度：

2019

学位类型：

硕士

学科专业：

中药学

导师：

范源

中图分类号：

R29[中国少数民族医学]

学科分类号：

030402[中华民族学];100516[民族医学];100809[民族药学]